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英文名稱
BRL-3A:BRL3A
產(chǎn)品形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)
貨號(hào)
P-X1122
產(chǎn)品分類
大鼠細(xì)胞系
規(guī)格
1×106
包裝
株
來源
肝臟
用途
僅供科研研究使用
細(xì)胞特性:
細(xì)胞別稱:BRL3A; BRL 3A; Buffalo Rat Liver-3A
種屬來源:大鼠
年齡性別:
組織來源:肝臟
生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介:BRL-3A細(xì)胞株的無血清條件培養(yǎng)基:是MSA的一個(gè)來源。 MSA多肽家族能夠部分滿足雞胚成纖維細(xì)胞對(duì)血清的需求。
生物等級(jí):1
細(xì)胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè):無
基因表達(dá)情況:Somatomedin like multiplication stimulating activity (MSA)
保藏機(jī)構(gòu):ATCC; CRL-1442 BCRC; 60218 ECACC; 85111503
培養(yǎng)基:90% DMEM+10% FBS+雙抗
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
運(yùn)輸和保存:
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備MEM(推薦iCell-0012)培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min,棄去上清液,加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6 cm 皿中,加入約 4 mL 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,棄去 消化液,將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細(xì)胞消化情況而定) ,然后在顯微鏡下 觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞,裝入無菌離心管中,1000 rpm 條件下離心 4 min,棄去上清液, 用 PBS 清洗一遍,棄盡 PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍 存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 1:2 傳代 。
9. 注意: 1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。
公司正在出售的產(chǎn)品:
魚胰島素受體(ISR)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
轉(zhuǎn)化相關(guān)基因MED11抗體 |
ISR ELISA KIT |
凝血酶(凝血因子II)輕鏈抗體 Anti-Thrombin light chain |
人程序性死亡-1(PD-1)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
Dlx5 |
HumanPD-1ELISAKit |
源轉(zhuǎn)錄因子DLX5抗體 |
梅克爾憩室綜合征相關(guān)蛋白5抗體 Anti-RPGRIP1L |
MED11 |
核受體蛋白NR2E1抗體 Anti-NR2E1/Tailless |
TNNT1 |
Wnt信號(hào)抑制因子1抗體 Anti-WIF1 |
線粒體核糖體蛋白L24抗體 |
骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T抗體 |
MRPL24 |
Cy5.5標(biāo)記大鼠IgG(型對(duì)照) |
胚胎干細(xì)胞抑制蛋白Suz12抗體 Anti-SUZ12/CHET9 |
Rat IgG / Cy5.5 |
氧化低密度脂蛋白抗體 Anti-ox-LDL |
造血干細(xì)胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1抗體 |
磷酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體 Anti-Phospho-PLK1(Ser482+Ser486+Ser490) |
HAX1 |
血管**素受體2抗體 Anti-TIE2/CD202b |
大鼠活化素B(ACV-B)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
小鼠12羥二十烷四烯酸(12-HETE)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
ACV-B ELISA Kit |
BRL-3A大鼠肝細(xì)胞12-HETEELISAKit |
GSK3β相互作用蛋白抗體 |
乳腺癌相關(guān)蛋白2抗體 |
HSPC210/GSK3beta interaction protein |
BCAS2 |