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細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
MMQ
1×106
P-X11057
產(chǎn)品詳情:
生長特性 懸浮細胞
細胞形態(tài) 圓形細胞,聚團生長
生長培養(yǎng)基 Ham's F-12K+15% HS+2.5% FBS+1% P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 該細胞為懸浮細胞,請注意離心收集細胞懸液;請勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液。
背景描述 The cells secrete prolactin and express functional dopamine receptors
年齡(性別) 5日齡
組織來源 腦垂體
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 其它腫瘤細胞
生物等級 1
倍增時間 ~48 hours
致瘤性 No, in immunosuppressed mice.Yes, in semisolid medium
受體表達情況 dopamine
保藏機構(gòu) ATCC; CRL-10609 DSMZ; ACC-484 KCB; KCB 200845YJ
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復(fù)蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理:
公司正在出售的產(chǎn)品:
NDST3蛋白抗體 |
原鈣粘蛋白γC5抗體 |
NDST3 |
磷酸化色氨酸羥化酶抗體 Anti-phospho-TPH(Ser19) |
6號染色體開放閱讀框163抗體 |
CBL |
C6orf163 |
原癌基因CBL2抗體 |
磷酸二酯酶4A8抗體 Anti-PDE4A8 |
PCDHGC5 |
肌萎縮側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白2(2號染色體)抗體 Anti-PAPK/ALS2CR2 |
Rabbit Anti-Horse IgG H&L / APC |
內(nèi)臟脂肪組織源性絲氨酸蛋白酶抑制蛋白抗體 Anti-SERPINA12/Vaspin |
EHD2蛋白抗體 |
APC標記的兔抗馬IgG H&L |
EHD2 |
大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)elisa分析檢測試劑盒 |
鋅指蛋白Zic2抗體 Anti-Zic2 |
8-iso-PG ELISA Kit |
A型流感-NS1抗體(神經(jīng)氨酸酶1) Anti-nonstructural protein 1/NS1 |
人甘露糖凝集素受體(MBLR)elisa分析檢測試劑盒 |
磷酸化Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1 Anti-Phospho-RasGRF1(Ser916) |
MBLRELISAKit |
S100鈣結(jié)合蛋白A6抗體 Anti-S100A6 |
大鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白4(MAP4)elisa檢測試劑盒 |
細胞色素b5含量測試盒 50T/48樣 比色法 |
純化線粒體膜通道孔(MPTP)比色法檢測試劑盒 |
大鼠垂體瘤細胞;MMQ通用型豬流感(SI)基因檢測試劑盒 |
MCART2蛋白抗體 |
19號染色體開放閱讀框45抗體 |
MCART2 |
C19orf45 |
實驗步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板,轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。