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運輸和保存:
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
英文名稱
Walker/LLC-WRC
256:WalkerLLCWRC 256
產(chǎn)品形態(tài)
母細胞樣 懸浮生長
貨號
P-X1150
產(chǎn)品分類
大鼠細胞系
規(guī)格
1×106
包裝
株
來源
乳腺
用途
僅供科研研究使用
細胞特性:
細胞別稱:Walker/LLC-WRC 256; Walker-256; Walker-Ca.256; Walker 256; W256
種屬來源:大鼠
年齡性別:
組織來源:乳腺
生長特性:懸浮生長
細胞形態(tài):母細胞樣
背景簡介:LLC-WRC 256細胞注入大鼠腹腔能快速形成腹水瘤,是研究抗腫瘤體內(nèi)模型的極好材料。
生物等級:1
細胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測:無
基因表達情況:
保藏機構(gòu):ATCC; CCL-38 ECACC; 87061101
培養(yǎng)基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備MEM(推薦iCell-0012)培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、細胞培養(yǎng)操作:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min,棄去上清液,加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓毎麘乙杭尤?6 cm 皿中,加入約 4 mL 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,棄去 消化液,將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ,然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞,裝入無菌離心管中,1000 rpm 條件下離心 4 min,棄去上清液, 用 PBS 清洗一遍,棄盡 PBS,進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度 5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液,注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產(chǎn)品:
NLRP13蛋白抗體 |
羧基端小結(jié)構(gòu)域磷酸酶2抗體 CTDSP2 |
NLRP13 |
21號染色體開放閱讀框66抗體 C21orf66 |
8號染色體開放閱讀框77抗體 |
Ras相關(guān)GTP結(jié)合蛋白抗體 RPH3AL |
C8orf77 |
PYROXD2蛋白抗體 PYROXD2 |
5號染色體開放閱讀框34抗體 C5orf34 |
調(diào)節(jié)因子X結(jié)合蛋白RFXAP抗體 RFXAP |
肌微管素相關(guān)蛋白4抗體 MTMR4 |
液泡蛋白分選蛋白37C抗體 VPS37C |
脊髓小腦共濟失調(diào)2型蛋白抗體 ATX2 |
低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體 ARH |
血小板白細胞C激酶底物源結(jié)構(gòu)域M3抗體 PLEKHM3 |
短卷曲螺旋蛋白SCOC抗體 SCOC |
白藜蘆醇含量測試盒 |
FITC標記人CD28單克隆抗體 human CD28/FITC |
細胞TSH-BETA蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 |
FLJ42569蛋白抗體 FLJ42569 |
小鼠β-防御素2(β-BD-2)elisa檢測試劑盒 |
硫酸酯酶修飾因子1抗體 SUMF1 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶試劑盒 |
腦啡肽酶2抗體 Neprilysin 2 |
組織GRK5激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) |
大鼠胱抑素D(CST5)elisa檢測試劑盒 |
人高半胱氨酸(Hcy)elisa分析檢測試劑盒 |
Walker/LLC-WRC 256大鼠腹水癌細胞植物(擬南芥)超氧化物歧化酶[鐵],葉綠體(SODB)elisa檢測試劑盒 |
小鼠基質(zhì)細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)elisa分析檢測試劑盒 |
人血液轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRANSFERRIN)比濁法定量檢測試劑盒 |
大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(sIL-1RⅡ)elisa檢測試劑盒 |
人α-防御素4(NP-4)elisa檢測試劑盒免費代測 |
三、培養(yǎng)注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題,責任由 客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議 1:2 傳代 。
9. 注意: 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。