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細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
英文簡(jiǎn)稱(chēng)
規(guī)格
貨號(hào)
RBL-2H3:RBL2H3
1×106
P-X1144
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱(chēng):RBL2H3; RBL 2H3; RBL.2H3;大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞
種屬來(lái)源:大鼠
年齡性別:
組織來(lái)源:外周血;化學(xué)誘變嗜堿性細(xì)胞;白血病
生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞
背景簡(jiǎn)介:RBL-2H3是1978年國(guó)立牙科研究所的學(xué)實(shí)驗(yàn)室從Wistar大鼠保持腫瘤狀態(tài)的嗜堿性細(xì)胞中分離和克隆出來(lái)的嗜堿性白血病細(xì)胞株。這些細(xì)胞具有高親和力的IgE受體。通過(guò)集聚這些受體或與鈣離子載體協(xié)同作用可以激活它們分泌組胺及其他遞質(zhì)。這株細(xì)胞廣泛地用于研究肥大細(xì)胞FcERI和分泌的生化途徑。RBL-2H3細(xì)胞是研究FcERI結(jié)構(gòu)的模型。它們廣泛地用于研究細(xì)胞分泌的不同方面,包括細(xì)胞內(nèi)鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。雖然幾乎所有批號(hào)的FBS都支持細(xì)胞的生長(zhǎng),但在某些批號(hào)中FcERI集聚后脫?;酶谩A硪恢甏笫笫葔A性細(xì)胞株(RBL,ATCC CRL-1378)不會(huì)脫?;?。
生物等級(jí):1
細(xì)胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè):無(wú)
基因表達(dá)情況:histamine
保藏機(jī)構(gòu):ATCC; CRL-2256 DSMZ; ACC-312
培養(yǎng)基:90% DMEM+10% FBS+雙抗
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
倍增時(shí)間:~50-60小時(shí)
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
公司正在出售的產(chǎn)品:
磷脂酸磷酸酶2C抗體 |
絲裂原活化蛋白激酶MAP4K5抗體 MAP4K5 |
PAP2c |
1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框180抗體 C1orf180 |
庚型肝炎病毒多聚蛋白/Hepatitis G Virus抗體 |
Rabbit Anti-Acetyl-Histone H3 (Lys56) antibody |
HGV Polyprotein |
PE標(biāo)記小鼠CD31單克隆抗體 mouse CD31/PE |
2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框16抗體 C2orf16 |
肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶FKBP11抗體 FKBP11 |
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白7抗體 CORO7 |
血小板源性生長(zhǎng)因子受體β樣蛋白抗體 PDGFRL |
雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體 Ovalbumin |
蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白51抗體 PTPIP51 |
嗅覺(jué)受體家族5亞基1抗體 OR5T1 |
碘酪氨酸脫碘酶抗體 IYD |
大鼠CD36elisa檢測(cè)試劑盒 |
F-box蛋白45抗體 FBXO45 |
小鼠雌二醇(E2)elisa檢測(cè)試劑盒 |
FITC標(biāo)記人CD64單克隆抗體 human CD64/FITC |
二代測(cè)序快速DNA建庫(kù)試劑盒for Illumina 24次 |
磷酸化組蛋白去乙?;?span>6抗體 phospho-HDAC6 (Ser22) |
寡核苷酸探針?lè)俏凰?span>AP-BCIP/NBT法DNA斑點(diǎn)雜交完全試劑盒 |
貓眼綜合征染色體候選基因6抗體 CECR6 |
小鼠胃泌素(GAS)elisa檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞磷酸二酯酶4(PDE4)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)elisa檢測(cè)試劑盒 |
RBL-2H3大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞人腎上腺素(EPI)elisa檢測(cè)試劑盒 |
人CD44分子(CD44)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
小鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)elisa檢測(cè)試劑盒 |
體液脊髓過(guò)氧化酶(MPO)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
大鼠促腎上皮質(zhì)釋放(CRH)elisa檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。