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WB封閉液的選用要求

日期:2024-10-08 15:28
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摘要: 封閉是Western Blot 至關(guān)重要的一部分, 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結(jié)合,為成功的WB奠定基礎(chǔ)。封閉液的選用要求: 1、常用封閉液為脫脂牛奶(光明或伊利等)、牛血清白蛋白(BSA)、無蛋白封閉液等。 2、封閉液濃度:封閉時(shí)一般用5%脫脂牛奶,也可用1-5%BSA或1%無蛋白封閉液;配制二抗稀釋液一般為1-5%脫脂牛奶,全部用PBS稀釋。 3、封閉時(shí)間:室溫1-2h、4度過夜或37度半小時(shí)。 4、封閉液pH:一般5%脫脂牛奶pH大約為6.0-6.5左右,而1%脫脂牛奶可能6.5-7,好像RD公司的W...

封閉是Western Blot 至關(guān)重要的一部分, 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結(jié)合,為成功的WB奠定基礎(chǔ)。封閉液的選用要求:

1、常用封閉液為脫脂牛奶(光明或伊利等)、牛血清白蛋白(BSA)、無蛋白封閉液等。

2、封閉液濃度:封閉時(shí)一般用5%脫脂牛奶,也可用1-5%BSA或1%無蛋白封閉液;配制二抗稀釋液一般為1-5%脫脂牛奶,全部用PBS稀釋。

3、封閉時(shí)間:室溫1-2h、4度過夜或37度半小時(shí)。

4、封閉液pH:一般5%脫脂牛奶pH大約為6.0-6.5左右,而1%脫脂牛奶可能6.5-7,好像RD公司的WB-Protocol中要求封閉液和稀釋抗體的封閉液需要調(diào)pH至7.4;但是大多數(shù)抗體不調(diào)pH也可以做出來。

5、個(gè)人經(jīng)驗(yàn):5%脫脂牛奶封閉效果佳,但有時(shí)也可能封閉過度,可以與BSA或無蛋白封閉液輪流更換。

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